Дослідження впливу екстракту зимолюбки на клітинні культури

Анотація

Розробка нових діуретичних засобів рослинного походження є актуальним напрямком. Chimaphila umbellata (L.) – багаторічна трав'яниста рослина, що має сечогінну, в'яжучу, болезаспокійливу та інші дії; і може застосовуватися для лікування станів, що виникають при захворюваннях нирок та сечовивідних шляхів. Трава зимолюбки сприяє виведенню азотистих і хлористих солей з організму завдяки вмісту глікозиду арбутину, дубильних речовин (до 5 %).

Мета. Оцінка впливу екстракту зимолюбки на клітинну культуру L929.

Матеріали та методи. Клітинна лінія L929 (фібробласти жирової тканини миші) отримана у низькотемпеатурному банку Інституту проблем Кріобіології та кріомедицини НАН України.  Клітини культивували у середовищі DMEM (Bio West, Франція) збагаченому 10% FBS (Lonza, Німеччина) з 1% антибіотику-антимікотику (Bio West, Франція), у СО2-інкубаторі (Thermo Fisher Scientific, США) при 37ºС в атмосфері з 5% CO2.

Визначення мінімальної токсичної концентрації, при якій клітини залишалися живими, оцінювали за морфологічними ознаками (форма, цілісність моношару, адгезія до пластику). Дослідження впливу екстракту зимолюбки на різні функції клітини визначали методами: здатність зберігати морфологічну цілісність – методом фазово-контрастної мікроскопії, енергетичний обмін –методом МТТ тесту, піноцитозну функцію – методом поглинання нейтрального червоного, міграційну функцію – методом скретч тесту, проліферативну активність – методом розрахунку подвоєння популяції.

Результати. Запроновано для подальшого дослідження застосовувати концентрації 0,05; 0,02, 0,01; 0,005% екстракту зимолюбки. Після проведення реакції МТТ мікроскопічно було підтверджено перехід МТТ в формазан в негативному контролі (нативні клітини), при концентраціях ЕЗ 0,01 % та нижче та відсутність реакції в позитивному контролі (клітини, вбиті етанолом) при концентраціях ЕЗ вище 0,02 %. При реєстрації показників реакції поглинання НЧ визначено, що ЕЗ в концентрації 0,02% та вище різко пригнічує піноцитозну активність, незважаючи на часткову збереженість адгезії клітин, зниження концентрації в два рази вже не впливає на мітохондрії. Концентрація 0,01 % знижує проліферативну активність, а при концентрації 0,005 % різниці з контрольним значеннями не виявлено.

Висновки. При вивченні оцінки впливу екстракту зимолюбки на клітинну культуру L929 встановлений токсичний вплив на дані клітини при додаванні до середовища культивування в концентрації вище 0,01 %. Токсичний вплив мав пороговий ефект. Найбільш чутливими виявились міграційна та проліферативна функції клітини, менш чутливими – енергетична, піноцитозна та збереження морфологічної цілісності клітин.