DOI: https://doi.org/10.15587/2519-4852.2016.87257

Количественное определение концентрации силденафила в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (lc-ms/ms)

Игорь Эрнестович Кузнецов, Елена Алексеевна Науменко, Наталия Константиновна Резниченко, Андрей Юрьевич Костюк, Роман Прокопович Савяк, Дмитрий Сергеевич Олейников

Анотація


Цель. Для изучения фармакокинетики спреевой формы силденафила (спрей оральный дозированный «Тегрум»), разработанной ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) с целью улучшения фармакокинетических характеристик существующих твердых форм для орального применения был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила в плазме крови человека с применением внутреннего стандарта, меченного 8 атомами дейтерия – силденафила-d8.

Методы. Силденафил извлекался из плазмы прямой жидкость-жидкостной экстракцией и определялся в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Разделение компонентов проводилось на хроматографической колонке Kinetex 2.6u C18, 50 x 4.6 mm, 2.6 µm фирмы Phenomenex при 45 °С с изократическим режимом элюирования подвижной фазы, состоящей из 2 мМ водного раствора аммония ацетата (рН 5,45±0,05) и ацетонитрила (10/90, об./об.) при скорости элюирования 0,4 мл/мин. Ионизацию cилденафила и cилденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). Для детектирования был использован мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских и дочерних ионов в следующих настройках масс-спектрометра: m/z 475,20/283,20 и 483,20/283,20 для силденафила и силденафила-d8 соответственно.

Результаты. Описанный выше метод был валидирован в линейном диапазоне 10,00-400,00 нг/мл с коэффициентом корреляции (r2) 0,99764 и показал надёжную правильность и воспроизводимость результатов.

Выводы. Разработанный экспресс-метод прямой жидкость - жидкостной экстракции из плазмы крови с одновременным осаждением белков, исключающий этапы упаривания и восстановления сухого остатка позволил достичь необходимую чувствительность метода и сократить время анализа. Использование дейтерированного внутреннего стандарта (силденафила-d8) позволило снизить предел количественного определения, достичь высокой чувствительности и специфичности, а также подавления матричного эффекта при достаточно высокой скорости определения, что позволяет использовать данную методику для рутинного определения количественного содержания силденафила в плазме крови при проведении фармакокинетических исследований.


Ключові слова


силденафил; силденафил-d8; спрей; фармакокинетика; плазма крови; количественное определение; ВЭЖХ-МС/МС; выбор внутреннего стандарта; эффект матрицы; валидация аналитического метода

Повний текст:

PDF (Русский)

Посилання


Gorpinchenko, I. I., Miroshnikov, Y. O. (2003). Erectile disfunction. Lviv: Medical world, 88.

Kanjanawart, S., Kongyingyoes, B., Gaysornsiri, D., Tangsucharit, P., Puapairoj, P., Vannaprasaht, S., Tiamkao, S. et. al. (2008). Bioequivalence and Pharmacokinetic Study of Sildenafil in Healthy Thai Male Volunteers. Srinagarind Medical Journal, 23 (1), 38–44.

Mahmoudian, M., Falahatpishe, H., Taiebi, L., Moghadam, E., Gholamine, B. (2010). Determination of pharmacokinetic parameters of sildenafil in Iranian volunteers by an HPLC method. Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences, 7 (1), 69–74.

Mahmoudian, M. (2005). Sildenafil Determination in Various Matrices: A Review. Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics, 4 (2), 72–75.

Dilek, I., Cooper, J., Aijaz, S. (2015). Selection of Internal Standards for LC-MS/MS Applications. Mass Spectrometry Applications to the Clinical Lab (MSACL), 3, 31–42.

Krishnamurthy, B., Shivaprakasha, R., Amitabha, G. (2009). Quantitation of Sildenafil in Human Plasma by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography. Pharmacology online, 2, 64–74.

Tripathi, A. S., Sheikh, I., Dewani, A. P., Shelke, P. G., Bakal, R. L., Chandewar, A. V., Mazumder, P. M. (2013). Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies. Saudi Pharmaceutical Journal, 21 (3), 317–321. doi: 10.1016/j.jsps.2012.09.003

Al-Ghazawi, M., Tutunji, M., AbuRuz, S. (2007). Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43 (2), 613–618. doi: 10.1016/j.jpba.2006.07.028

Berzas, J. J., Rodriguez, J., Villasenor, M. J., Contento, A. M., Cabello, M. P. (2002). Validation of a capillary gas chromatographic method for the determination of Sildenafil Citrate in its pharmaceutical formulations (Viagra). Experimental design for evaluating the ruggedness of the method. Chromatographia, 55 (9-10), 601–606. doi: 10.1007/bf02492908

Marcelin-Jimenez, G., Angeles-Moreno, A. P., Contreras-Zavala, L., Garcia-Gonzalez, A., Ramirez-San Juan, E. (2012). Comparison of Fasting Bioavailability Among 100-mg Commercial, 100-mg Generic, and 50-mg Chewable Generic Sildenafil Tablets in Healthy Male Mexican Volunteers: A Single-Dose, 3-Period, Crossover Study. Clinical Therapeutics, 34 (3), 689–698. doi: 10.1016/j.clinthera.2012.01.021

Alkharfy, K. M. (2009). Simple and sensitive LC-ESI-MS method for the quantitation of sildenafil in plasma samples. Journal of Separation Science, 32 (22), 3866–3870. doi: 10.1002/jssc.200900469

Zayed, R., Kamel, A. O., Shukr, M., El-Shamy, A. E.-H. (2012). An in vitro and in vivo comparative study of directly compressed solid dispersions and freeze dried sildenafil citrate sublingual tablets for management of pulmonary arterial hypertension. Acta Pharmaceutica, 62 (3), 411–432. doi: 10.2478/v10007-012-0027-9

Challa, B. R., Awen, B. Z., Chandu, B. R., Khagga, M., Bannoth, C. K., Kanala, K. et. al. (2010). Sildenafil and N-desmethyl sildenafil quantification in human plasma by HPLC coupled with ESI-MS/MS detection: Application to bioequivalence study. Analytical Methods, 2 (8), 1043–1050. doi: 10.1039/c0ay00062k

Johnson, R. D., Lewis, R. J. (2006). Identification of Sildenafil (Viagra®) and Its Metabolite (UK-103,320) in Six Aviation Fatalities. Federal Aviation Administration. Washington, 11.

Sychev, K. S. (2010). Practical guidance on liquid chromatography. Moscow: Tehnosfera, 272.

Good Laboratory Practice. Oecd principles and guidance for compliance monitoring (2005). OECD.

On approval of documents on quality assurance of medicines (2009). The Ministry of Health of Ukraine, # 95.

Bioanalytical method validation: Guidance for industry (2001). U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. Center for Drug Evalution and Research (CDER). Center for Veterinary Medicine (CVM).

Guideline on bioanalytical method validation (2011). European Medicines Agency (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009).

Zhukova, N. A., Libina, V. V., Kudris, I. V., Padalko, N. N. (2013). Bioanalytical Method Validation. Kyiv, 35.


Пристатейна бібліографія ГОСТ


Горпинченко, И. И. Эректильная дисфункция [Текст] / И. И. Горпинченко, Я. О. Мирошников. – Львов: Медицина мира, 2003. – 88 c.

Kanjanawart, S. Bioequivalence and Pharmacokinetic Study of Sildenafil in Healthy Thai Male Volunteers [Text] / S. Kanjanawart, B. Kongyingyoes, D. Gaysornsiri, P. Tangsucharit, P. Puapairoj, S. Vannaprasaht, S. Tiamkao et. al. // Srinagarind Medical Journal. – 2008. – Vol. 23, Issue 1. – P. 38–44.

Mahmoudian, M. Determination of pharmacokinetic parameters of sildenafil in Iranian volunteers by an HPLC method [Text] / M. Mahmoudian, H. Falahatpishe, L. Taiebi, E. Moghadam, B. Gholamine // Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences. – 2010. – Vol. 7, Issue 1. – P. 69–74.

Mahmoudian, M. Sildenafil Determination in Various Matrices: A Review [Text] / M. Mahmoudian // Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics. – 2005. – Vol. 4, Issue 2. – P. 72–75.

Dilek, I. Selection of Internal Standards for LC-MS/MS Applications [Text] / I. Dilek, J. Cooper, S. Aijaz // Mass Spectrometry Applications to the Clinical Lab (MSACL). – 2015. – Vol. 3. – P. 31–42.

Krishnamurthy, B. Quantitation of Sildenafil in Human Plasma by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography [Text] / B. Krishnamurthy, R. Shivaprakasha, G. Amitabha // Pharmacology online. – 2009. – Vol. 2. – P. 64–74.

Tripathi, A. S. Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies [Text] / A. S. Tripathi, I. Sheikh, A. P. Dewani, P. G. Shelke, R. L. Bakal, A. V. Chandewar, P. M. Mazumder // Saudi Pharmaceutical Journal. – 2013. – Vol. 21, Issue 3. – P. 317–321. doi: 10.1016/j.jsps.2012.09.003

Al-Ghazawi, M. Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study [Text] / M. Al-Ghazawi, M. Tutunji, S. AbuRuz // Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. – 2007. – Vol. 43, Issue 2. – P. 613–618. doi: 10.1016/j.jpba.2006.07.028

Berzas, J. J. Validation of a Capillary Gas Chromatographic Method for the Determination of Sildenafil Citrate in its Pharmaceutical Formulations (Viagra). Experimental Design for Evaluating the Ruggedness of the Method [Text] / J. J. Berzas, J. Rodriguez, M. J. Villasenor, A. M. Contento, M. P. Cabello // Chromatographia. – 2002. – Vol. 55, Issue 9-10. – P. 601–606. doi: 10.1007/bf02492908

Marcelin-Jimenez, G. Comparison of Fasting Bioavailability Among 100-mg Commercial, 100-mg Generic, and 50-mg Chewable Generic Sildenafil Tablets in Healthy Male Mexican Volunteers: A Single-Dose, 3-Period, Crossover Study [Text] / G. Marcelin-Jimenez, A. P. Angeles-Moreno, L. Contreras-Zavala, A. Garcia-Gonzalez, E. Ramirez-San Juan // Clinical Therapeutics. – 2012. – Vol. 34, Issue 3. – P. 689–698. doi: 10.1016/j.clinthera.2012.01.021

Alkharfy, K. V. Simple and sensitive LC-ESI-MS method for the quantitation of sildenafil in plasma samples [Text] / K. V. Alkharfy // Journal of Separation Science. – 2009. – Vol. 32, Issue 22. – P. 3866–3870. doi: 10.1002/jssc.200900469

Zayed, R. An in vitro and in vivo comparative study of directly compressed solid dispersions and freeze dried sildenafil citrate sublingual tablets for management of pulmonary arterial hypertension [Text] / R. Zayed, A. O. Kamel, M. Shukr, A. E.-H. El-Shamy // Acta Pharmaceutica. – 2012. – Vol. 62, Issue 3. – P. 411–432. doi: 10.2478/v10007-012-0027-9

Challa, B. R. Sildenafil and N-desmethyl sildenafil quantification in human plasma by HPLC coupled with ESI-MS/MS detection: Application to bioequivalence study [Text] / B. R. Challa, B. Z. Awen, B. R. Chandu, M. Khagga, C. K. Bannoth, K. Kanala et. al. // Analytical Methods. – 2010. – Vol. 2, Issue 8. – P. 1043–1050. doi: 10.1039/c0ay00062k

Johnson, R. D. Identification of Sildenafil (Viagra®) and Its Metabolite (UK-103,320) in Six Aviation Fatalities [Text] / R. D. Johnson, R. J. Lewis // Federal Aviation Administration. – Washington, 2006. – 11 p.

Сычев, К. С. Практическое руководство по жидкостной хроматографи [Текст] / К. С. Сычев. – М.: Техносфера, 2010. – 272 c.

Good Laboratory Practice. Oecd principles and guidance for compliance monitoring [Text]. – OECD, 2005.

Про затвердження документів з питань забезпечення якості лікарських засобів [Текст]. – Міністерство охорони здоров’я України, 2009. – № 95.

Bioanalytical method validation: Guidance for industry [Text]. – U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. Center for Drug Evalution and Research (CDER). Center for Veterinary Medicine (CVM), 2001.

Guideline on bioanalytical method validation [Text]. – European Medicines Agency (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009), 2011.

Жукова, Н. А. Валидация биоаналитического метода [Текст]: метод. рек. / Н. А. Жукова, В. В. Либина, И. В. Кудрис, Н. Н. Падалко. – Киев, 2013. – 35 с.







Copyright (c) 2016 Игорь Эрнестович Кузнецов, Елена Алексеевна Науменко, Наталия Константиновна Резниченко, Андрей Юрьевич Костюк, Роман Прокопович Савяк, Дмитрий Сергеевич Олейников

ISSN 2519-4852 (Online), ISSN 2519-4844 (Print)