Количественное определение концентрации силденафила в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (lc-ms/ms)

Автор(и)

  • Игорь Эрнестович Кузнецов ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, Україна https://orcid.org/0000-0003-1157-5128
  • Елена Алексеевна Науменко ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, Україна https://orcid.org/0000-0001-5247-5751
  • Наталия Константиновна Резниченко ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, https://orcid.org/0000-0001-7736-4599
  • Андрей Юрьевич Костюк ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, Україна https://orcid.org/0000-0002-0137-7139
  • Роман Прокопович Савяк ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, Україна https://orcid.org/0000-0001-9691-9473
  • Дмитрий Сергеевич Олейников ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000, https://orcid.org/0000-0002-8777-5815

DOI:

https://doi.org/10.15587/2519-4852.2016.87257

Ключові слова:

силденафил, силденафил-d8, спрей, фармакокинетика, плазма крови, количественное определение, ВЭЖХ-МС/МС, выбор внутреннего стандарта, эффект матрицы, валидация аналитического метода

Анотація

Цель. Для изучения фармакокинетики спреевой формы силденафила (спрей оральный дозированный «Тегрум»), разработанной ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) с целью улучшения фармакокинетических характеристик существующих твердых форм для орального применения был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила в плазме крови человека с применением внутреннего стандарта, меченного 8 атомами дейтерия – силденафила-d8.

Методы. Силденафил извлекался из плазмы прямой жидкость-жидкостной экстракцией и определялся в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Разделение компонентов проводилось на хроматографической колонке Kinetex 2.6u C18, 50 x 4.6 mm, 2.6 µm фирмы Phenomenex при 45 °С с изократическим режимом элюирования подвижной фазы, состоящей из 2 мМ водного раствора аммония ацетата (рН 5,45±0,05) и ацетонитрила (10/90, об./об.) при скорости элюирования 0,4 мл/мин. Ионизацию cилденафила и cилденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). Для детектирования был использован мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских и дочерних ионов в следующих настройках масс-спектрометра: m/z 475,20/283,20 и 483,20/283,20 для силденафила и силденафила-d8 соответственно.

Результаты. Описанный выше метод был валидирован в линейном диапазоне 10,00-400,00 нг/мл с коэффициентом корреляции (r2) 0,99764 и показал надёжную правильность и воспроизводимость результатов.

Выводы. Разработанный экспресс-метод прямой жидкость - жидкостной экстракции из плазмы крови с одновременным осаждением белков, исключающий этапы упаривания и восстановления сухого остатка позволил достичь необходимую чувствительность метода и сократить время анализа. Использование дейтерированного внутреннего стандарта (силденафила-d8) позволило снизить предел количественного определения, достичь высокой чувствительности и специфичности, а также подавления матричного эффекта при достаточно высокой скорости определения, что позволяет использовать данную методику для рутинного определения количественного содержания силденафила в плазме крови при проведении фармакокинетических исследований.

Біографії авторів

Игорь Эрнестович Кузнецов, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Доктор біологічних наук, професор, директор 

Елена Алексеевна Науменко, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Зступник директора з якості

Наталия Константиновна Резниченко, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Завідувач лабораторією

Біоаналітична лабораторія

Андрей Юрьевич Костюк, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Провідний інженер

Роман Прокопович Савяк, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Кандидат хімічних наук, консультант 

 

Дмитрий Сергеевич Олейников, ТОВ «КДЦ «ФАРМБІОТЕСТ» вул. Орджонікідзе, 9, м. Рубіжне, Україна, 93000

Консультант 

Посилання

  1. Gorpinchenko, I. I., Miroshnikov, Y. O. (2003). Erectile disfunction. Lviv: Medical world, 88.
  2. Kanjanawart, S., Kongyingyoes, B., Gaysornsiri, D., Tangsucharit, P., Puapairoj, P., Vannaprasaht, S., Tiamkao, S. et. al. (2008). Bioequivalence and Pharmacokinetic Study of Sildenafil in Healthy Thai Male Volunteers. Srinagarind Medical Journal, 23 (1), 38–44.
  3. Mahmoudian, M., Falahatpishe, H., Taiebi, L., Moghadam, E., Gholamine, B. (2010). Determination of pharmacokinetic parameters of sildenafil in Iranian volunteers by an HPLC method. Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences, 7 (1), 69–74.
  4. Mahmoudian, M. (2005). Sildenafil Determination in Various Matrices: A Review. Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics, 4 (2), 72–75.
  5. Dilek, I., Cooper, J., Aijaz, S. (2015). Selection of Internal Standards for LC-MS/MS Applications. Mass Spectrometry Applications to the Clinical Lab (MSACL), 3, 31–42.
  6. Krishnamurthy, B., Shivaprakasha, R., Amitabha, G. (2009). Quantitation of Sildenafil in Human Plasma by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography. Pharmacology online, 2, 64–74.
  7. Tripathi, A. S., Sheikh, I., Dewani, A. P., Shelke, P. G., Bakal, R. L., Chandewar, A. V., Mazumder, P. M. (2013). Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies. Saudi Pharmaceutical Journal, 21 (3), 317–321. doi: 10.1016/j.jsps.2012.09.003
  8. Al-Ghazawi, M., Tutunji, M., AbuRuz, S. (2007). Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43 (2), 613–618. doi: 10.1016/j.jpba.2006.07.028
  9. Berzas, J. J., Rodriguez, J., Villasenor, M. J., Contento, A. M., Cabello, M. P. (2002). Validation of a capillary gas chromatographic method for the determination of Sildenafil Citrate in its pharmaceutical formulations (Viagra). Experimental design for evaluating the ruggedness of the method. Chromatographia, 55 (9-10), 601–606. doi: 10.1007/bf02492908
  10. Marcelin-Jimenez, G., Angeles-Moreno, A. P., Contreras-Zavala, L., Garcia-Gonzalez, A., Ramirez-San Juan, E. (2012). Comparison of Fasting Bioavailability Among 100-mg Commercial, 100-mg Generic, and 50-mg Chewable Generic Sildenafil Tablets in Healthy Male Mexican Volunteers: A Single-Dose, 3-Period, Crossover Study. Clinical Therapeutics, 34 (3), 689–698. doi: 10.1016/j.clinthera.2012.01.021
  11. Alkharfy, K. M. (2009). Simple and sensitive LC-ESI-MS method for the quantitation of sildenafil in plasma samples. Journal of Separation Science, 32 (22), 3866–3870. doi: 10.1002/jssc.200900469
  12. Zayed, R., Kamel, A. O., Shukr, M., El-Shamy, A. E.-H. (2012). An in vitro and in vivo comparative study of directly compressed solid dispersions and freeze dried sildenafil citrate sublingual tablets for management of pulmonary arterial hypertension. Acta Pharmaceutica, 62 (3), 411–432. doi: 10.2478/v10007-012-0027-9
  13. Challa, B. R., Awen, B. Z., Chandu, B. R., Khagga, M., Bannoth, C. K., Kanala, K. et. al. (2010). Sildenafil and N-desmethyl sildenafil quantification in human plasma by HPLC coupled with ESI-MS/MS detection: Application to bioequivalence study. Analytical Methods, 2 (8), 1043–1050. doi: 10.1039/c0ay00062k
  14. Johnson, R. D., Lewis, R. J. (2006). Identification of Sildenafil (Viagra®) and Its Metabolite (UK-103,320) in Six Aviation Fatalities. Federal Aviation Administration. Washington, 11.
  15. Sychev, K. S. (2010). Practical guidance on liquid chromatography. Moscow: Tehnosfera, 272.
  16. Good Laboratory Practice. Oecd principles and guidance for compliance monitoring (2005). OECD.
  17. On approval of documents on quality assurance of medicines (2009). The Ministry of Health of Ukraine, # 95.
  18. Bioanalytical method validation: Guidance for industry (2001). U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. Center for Drug Evalution and Research (CDER). Center for Veterinary Medicine (CVM).
  19. Guideline on bioanalytical method validation (2011). European Medicines Agency (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009).
  20. Zhukova, N. A., Libina, V. V., Kudris, I. V., Padalko, N. N. (2013). Bioanalytical Method Validation. Kyiv, 35.

##submission.downloads##

Опубліковано

2016-12-28

Як цитувати

Кузнецов, И. Э., Науменко, Е. А., Резниченко, Н. К., Костюк, А. Ю., Савяк, Р. П., & Олейников, Д. С. (2016). Количественное определение концентрации силденафила в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (lc-ms/ms). ScienceRise: Pharmaceutical Science, (4 (4), 13–23. https://doi.org/10.15587/2519-4852.2016.87257

Номер

№ 4 (4) (2016)

Розділ

Фармацевтичні науки

Ліцензія

Авторське право (c) 2016 Игорь Эрнестович Кузнецов, Елена Алексеевна Науменко, Наталия Константиновна Резниченко, Андрей Юрьевич Костюк, Роман Прокопович Савяк, Дмитрий Сергеевич Олейников

Creative Commons License

Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution 4.0 International License.

Наше видання використовує положення про авторські права Creative Commons CC BY для журналів відкритого доступу.