Количественное определение концентрации силденафила в плазме крови человека методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (lc-ms/ms)
DOI:
https://doi.org/10.15587/2519-4852.2016.87257Ключові слова:
силденафил, силденафил-d8, спрей, фармакокинетика, плазма крови, количественное определение, ВЭЖХ-МС/МС, выбор внутреннего стандарта, эффект матрицы, валидация аналитического методаАнотація
Цель. Для изучения фармакокинетики спреевой формы силденафила (спрей оральный дозированный «Тегрум»), разработанной ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) с целью улучшения фармакокинетических характеристик существующих твердых форм для орального применения был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила в плазме крови человека с применением внутреннего стандарта, меченного 8 атомами дейтерия – силденафила-d8.
Методы. Силденафил извлекался из плазмы прямой жидкость-жидкостной экстракцией и определялся в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ-МС/МС). Разделение компонентов проводилось на хроматографической колонке Kinetex 2.6u C18, 50 x 4.6 mm, 2.6 µm фирмы Phenomenex при 45 °С с изократическим режимом элюирования подвижной фазы, состоящей из 2 мМ водного раствора аммония ацетата (рН 5,45±0,05) и ацетонитрила (10/90, об./об.) при скорости элюирования 0,4 мл/мин. Ионизацию cилденафила и cилденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). Для детектирования был использован мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских и дочерних ионов в следующих настройках масс-спектрометра: m/z 475,20/283,20 и 483,20/283,20 для силденафила и силденафила-d8 соответственно.
Результаты. Описанный выше метод был валидирован в линейном диапазоне 10,00-400,00 нг/мл с коэффициентом корреляции (r2) 0,99764 и показал надёжную правильность и воспроизводимость результатов.
Выводы. Разработанный экспресс-метод прямой жидкость - жидкостной экстракции из плазмы крови с одновременным осаждением белков, исключающий этапы упаривания и восстановления сухого остатка позволил достичь необходимую чувствительность метода и сократить время анализа. Использование дейтерированного внутреннего стандарта (силденафила-d8) позволило снизить предел количественного определения, достичь высокой чувствительности и специфичности, а также подавления матричного эффекта при достаточно высокой скорости определения, что позволяет использовать данную методику для рутинного определения количественного содержания силденафила в плазме крови при проведении фармакокинетических исследований.
Посилання
- Gorpinchenko, I. I., Miroshnikov, Y. O. (2003). Erectile disfunction. Lviv: Medical world, 88.
- Kanjanawart, S., Kongyingyoes, B., Gaysornsiri, D., Tangsucharit, P., Puapairoj, P., Vannaprasaht, S., Tiamkao, S. et. al. (2008). Bioequivalence and Pharmacokinetic Study of Sildenafil in Healthy Thai Male Volunteers. Srinagarind Medical Journal, 23 (1), 38–44.
- Mahmoudian, M., Falahatpishe, H., Taiebi, L., Moghadam, E., Gholamine, B. (2010). Determination of pharmacokinetic parameters of sildenafil in Iranian volunteers by an HPLC method. Turkish Journal of Pharmaceutical Sciences, 7 (1), 69–74.
- Mahmoudian, M. (2005). Sildenafil Determination in Various Matrices: A Review. Iranian Journal of Pharmacology & Therapeutics, 4 (2), 72–75.
- Dilek, I., Cooper, J., Aijaz, S. (2015). Selection of Internal Standards for LC-MS/MS Applications. Mass Spectrometry Applications to the Clinical Lab (MSACL), 3, 31–42.
- Krishnamurthy, B., Shivaprakasha, R., Amitabha, G. (2009). Quantitation of Sildenafil in Human Plasma by Reverse Phase High Performance Liquid Chromatography. Pharmacology online, 2, 64–74.
- Tripathi, A. S., Sheikh, I., Dewani, A. P., Shelke, P. G., Bakal, R. L., Chandewar, A. V., Mazumder, P. M. (2013). Development and validation of RP-HPLC method for sildenafil citrate in rat plasma-application to pharmacokinetic studies. Saudi Pharmaceutical Journal, 21 (3), 317–321. doi: 10.1016/j.jsps.2012.09.003
- Al-Ghazawi, M., Tutunji, M., AbuRuz, S. (2007). Simultaneous determination of sildenafil and N-desmethyl sildenafil in human plasma by high-performance liquid chromatography method using electrochemical detection with application to a pharmacokinetic study. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 43 (2), 613–618. doi: 10.1016/j.jpba.2006.07.028
- Berzas, J. J., Rodriguez, J., Villasenor, M. J., Contento, A. M., Cabello, M. P. (2002). Validation of a capillary gas chromatographic method for the determination of Sildenafil Citrate in its pharmaceutical formulations (Viagra). Experimental design for evaluating the ruggedness of the method. Chromatographia, 55 (9-10), 601–606. doi: 10.1007/bf02492908
- Marcelin-Jimenez, G., Angeles-Moreno, A. P., Contreras-Zavala, L., Garcia-Gonzalez, A., Ramirez-San Juan, E. (2012). Comparison of Fasting Bioavailability Among 100-mg Commercial, 100-mg Generic, and 50-mg Chewable Generic Sildenafil Tablets in Healthy Male Mexican Volunteers: A Single-Dose, 3-Period, Crossover Study. Clinical Therapeutics, 34 (3), 689–698. doi: 10.1016/j.clinthera.2012.01.021
- Alkharfy, K. M. (2009). Simple and sensitive LC-ESI-MS method for the quantitation of sildenafil in plasma samples. Journal of Separation Science, 32 (22), 3866–3870. doi: 10.1002/jssc.200900469
- Zayed, R., Kamel, A. O., Shukr, M., El-Shamy, A. E.-H. (2012). An in vitro and in vivo comparative study of directly compressed solid dispersions and freeze dried sildenafil citrate sublingual tablets for management of pulmonary arterial hypertension. Acta Pharmaceutica, 62 (3), 411–432. doi: 10.2478/v10007-012-0027-9
- Challa, B. R., Awen, B. Z., Chandu, B. R., Khagga, M., Bannoth, C. K., Kanala, K. et. al. (2010). Sildenafil and N-desmethyl sildenafil quantification in human plasma by HPLC coupled with ESI-MS/MS detection: Application to bioequivalence study. Analytical Methods, 2 (8), 1043–1050. doi: 10.1039/c0ay00062k
- Johnson, R. D., Lewis, R. J. (2006). Identification of Sildenafil (Viagra®) and Its Metabolite (UK-103,320) in Six Aviation Fatalities. Federal Aviation Administration. Washington, 11.
- Sychev, K. S. (2010). Practical guidance on liquid chromatography. Moscow: Tehnosfera, 272.
- Good Laboratory Practice. Oecd principles and guidance for compliance monitoring (2005). OECD.
- On approval of documents on quality assurance of medicines (2009). The Ministry of Health of Ukraine, # 95.
- Bioanalytical method validation: Guidance for industry (2001). U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. Center for Drug Evalution and Research (CDER). Center for Veterinary Medicine (CVM).
- Guideline on bioanalytical method validation (2011). European Medicines Agency (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009).
- Zhukova, N. A., Libina, V. V., Kudris, I. V., Padalko, N. N. (2013). Bioanalytical Method Validation. Kyiv, 35.
##submission.downloads##
Опубліковано
Як цитувати
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2016 Игорь Эрнестович Кузнецов, Елена Алексеевна Науменко, Наталия Константиновна Резниченко, Андрей Юрьевич Костюк, Роман Прокопович Савяк, Дмитрий Сергеевич Олейников
![Creative Commons License](http://i.creativecommons.org/l/by/4.0/88x31.png)
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Наше видання використовує положення про авторські права Creative Commons CC BY для журналів відкритого доступу.