Разработка и валидация методики количественного определения силденафила и n-десметил силденафила с помощью ВЭЖХ-МС/МС в плазме крови человека
DOI:
https://doi.org/10.15587/2519-4852.2017.92823Ключові слова:
силденафил, N-десметил силденафил, фармакокинетика, ВЭЖХ-МС/МС, эффект матрицы, дейтерированные стандарты, биоэквивалентностьАнотація
Цель. Для изучения биоэквивалентности таблетированной формы силденафила (таблетки «Тегрум» 100 мг), производства ООО «НПФ «Микрохим» (г. Рубежное, Украина) был разработан и валидирован быстрый, простой и специфический метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита - N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением внутренних стандартов, меченных атомами дейтерия. Извлечение аналитов из плазмы крови выполнялось методом прямой жидкость-жидкостной экстракции.
Методы. Содержание силденафила и его десметилированного метаболита определяли в надосадочной жидкости методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемным масс-спектрометрическим детектированием. Ионизацию cилденафила, N-десметил силденафила, cилденафила-d8 и N-десметил силденафила-d8 проводили электрораспылением в положительном режиме (ESI, Positive). При детектировании использовали мониторинг мультиреакций (MRM) выбранных материнских ионов с m/z 475,30; 483,20; 461,20; 469,20. Дочерний ион был выбран с m/z 283,10 для всех анализируемых соединений.
Результаты. В ходе валидации данного метода в линейном диапазоне 5,05-1009,92 нг/мл для силденафила и 2,24-400,84 нг/мл для N-десметил силденафила коэффициент корреляции (r2) составил 0,9975 и 0,9973 соответственно, также была продемонстрирована надёжная правильность и воспроизводимость результатов для обеих аналитов.
Выводы. Разработан и валидирован простой, специфический и чувствительный ВЭЖХ-МС/МС метод количественного определения концентрации силденафила и его активного метаболита N-десметил силденафила в плазме крови человека с применением меченных стабильными изотопами внутренних стандартов - силденафил-d8 и N-десметил силденафил- d8. Разработанный нами экспресс-метод подготовки биологических образцов, позволяет исключить влияние биологической матрицы на получаемые результаты и определять низкие концентрации обоих аналитов в надосадочной жидкости без применения таких трудоемких и времязатратных процедур, как концентрирование пробы, восстановление сухого остатка или дорогостоящей твердофазной экстракции. Экспериментальные данные, полученные в ходе полной валидации метода, соответствуют установленным национальным и международным требованиям, а так же подтверждают высокую специфичность, чувствительность, точность, воспроизводимость и экономичность разработанного нами метода.
Посилання
- Kuznetsov, I. E., Naumenko, H. A., Reznichenko, N. K., Kostiuk, A. Yu., Savyak, R. P., Oleynikov, D. S. (2016). The quantitative determination of sildenafil in human plasma by high performance liquid chromatography – mass spectrometry (LC-MS/MS). ScienceRise: Pharmaceutical Science, 4 (4), 13–23. doi: 10.15587/2519-4852.2016.87257
- Marcelín-Jiménez, G., Ángeles-Moreno, A. P., Contreras-Zavala, L., García-González, A., Ramírez-San Juan, E. (2012). Comparison of Fasting Bioavailability Among 100-mg Commercial, 100-mg Generic, and 50-mg Chewable Generic Sildenafil Tablets in Healthy Male Mexican Volunteers: A Single-Dose, 3-Period, Crossover Study. Clinical Therapeutics, 34 (3), 689–698. doi: 10.1016/j.clinthera.2012.01.021
- Alkharfy, K. M. (2009). Simple and sensitive LC-ESI-MS method for the quantitation of sildenafil in plasma samples. Journal of Separation Science, 32 (22), 3866–3870. doi: 10.1002/jssc.200900469
- Zayed, R., Kamel, A. O., Shukr, M., El-Shamy, A. E.-H. (2012). An in vitro and in vivo comparative study of directly compressed solid dispersions and freeze dried sildenafil citrate sublingual tablets for management of pulmonary arterial hypertension. Acta Pharmaceutica, 62 (3), 411–432. doi: 10.2478/v10007-012-0027-9
- Johnson, R. D., Lewis, R. J. (2006). Identification of Sildenafil (Viagra®) and Its Metabolite (UK-103,320) in Six Aviation Fatalities. Federal Aviation Administration. Washington, 11.
- Challa, B. R., Awen, B. Z., Chandu, B. R., Khagga, M., Bannoth, C. K., Kanala, K. et. al. (2010). Sildenafil and N-desmethyl sildenafil quantification in human plasma by HPLC coupled with ESI-MS/MS detection: Application to bioequivalence study. Analytical Methods, 2 (8), 1043–1050. doi: 10.1039/c0ay00062k
- Sychev, K. S. (2010). Practical guidance on liquid chromatography. Moscow: Tehnosfera, 272.
- Good Laboratory Practice. Oecd principles and guidance for compliance monitoring (2005). OECD.
- Bioanalytical method validation: Guidance for industry (2001). U. S. Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration. Center for Drug Evalution and Research (CDER). Center for Veterinary Medicine (CVM).
- Guideline on bioanalytical method validation (2011). European Medicines Agency (EMEA/CHMP/EWP/192217/2009).
- ST-N MOZU 42-7.0:2008. Nastanova. Likars'ki zasoby. Nalezhna Laboratorna Praktyka (2009). Kyiv: Ministerstvo ohorony zdorov'ja Ukrai'ny, 243.
- Zhukova, N. A., Libina, V. V., Kudris, I. V., Padalko, N. N. (2013). Bioanalytical Method Validation. Kyiv, 35.
##submission.downloads##
Опубліковано
Як цитувати
Номер
Розділ
Ліцензія
Авторське право (c) 2017 Игорь Эрнестович Кузнецов, Елена Алексеевна Науменко, Наталия Константиновна Резниченко, Андрей Юрьевич Костюк, Роман Прокопович Савяк, Дмитрий Сергеевич Олейников
![Creative Commons License](http://i.creativecommons.org/l/by/4.0/88x31.png)
Ця робота ліцензується відповідно до Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Наше видання використовує положення про авторські права Creative Commons CC BY для журналів відкритого доступу.