Експерементальне визначення оптимальних параметрів інактиваціх вірусвмисного матеріалу фотодинамічним методом

Анотація

Вступ. Для отримання вакцинних антигенів, штами, як правило, інактивують або шляхом нагрівання, аюо обробкою хімічними речовинами: формаліном чи пропіолактоном, ацетоном, спиртом, мертіолятом тощо. Зазначені речовини можуть вступати в хімічну реакцію з білками антигенів та змінювати їхню хімічну структуру або конфігурацію, утворюючи ковалентні зв’язки між білками токсинів і хімічним чинником, в наслідок чого з’являються аномальні антигенні детермінанти, що збільшують реактогенність та алергенність вакцинних препаратів. Однією з сучасних тенденцій щодо проблем удосконалення вакцинних препаратів є пошук сполук та методів для інактивації патогенів, які б були безпечними та не призводили до появи аномальних антигенних детермінант. На цей час встановлено, що системи інактивації патогенів (СІП) в препаратах крові є ефективними проти численних бактерій, вірусів і паразитів та широко застосовуються в технологіях обеззаражування продуктів крові в трансфузіології.  Таких як флавіни, який здатен до фотомодифікації, тобто переносить заряд при поглинанні фотонів, що опосередковує клітинну передачу сигналів або експресію генів в ендогенних білкових комплексах, таких як домени сприйняття напруги світла й кисню в бактеріях і рослинах. Матеріали та методи. Об’єктом дослідження є бактеріофаг полівалентний Піофаг®. Референс-штами бактерій (Staphylococcus aureus ATCC 25923 (F-49), Escherichia coli ATCC 25922 (F-50) та Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (F-51). Як джерело ультрафіолету використовували бактерицидні опромінювачі (бактерицидна довжина хвилі 253,7 нм). Як фотоінактиватори/фотосенсибілізатори було використано суміш (1:1:1) розчинів рибофлавіну, рибофлавіну менадіону сульфат натрію (менадіону) та піродоксину гідрохлориду у концентрації від 2×10-4 % до 2×10-6 % в полісорбаті-80, (Fluka, Австрія). Визначення інфекційної активності фагів проводили титруванням за Аппельманом, за Грація та за допомогою spot-тесту. Результати та обговорення. За результатами визначення кількості бляшкоутворюючих одиниць (БУО/мл) Піофаг® встановлено достовірне зниження цього показника при застосуванні ФС. Подовження часу опромінення до 45 хв призводило до 100 % віруліцидного ефекту і в контролі. Перевірка на спонтанну реверсію цих зразків протягом трьох місяців не виявила живих вірусів. Отримані результати вказують на те, що ультрафіолетове опромінення (УФО) викликає, скоріш за все, локальні зміни вірусної нуклеїнової кислоти в вірусах Піофаг®, що ведуть до заміни окремих основ, таким чином реверсія штамів бактеріофагів, які входять до складу Піофаг® не відбувається Висновок. За результатами експериментів найкращі результати щодо фотоінактивації вірусвмисного матеріалу було отримано для 0,02 % і 0,01 % суміші фотосенсибілізаторів. Час опромінення УФО при цих концентраціях складає від 5 до 15 хвилин. Для практичного використання рекомендовано застосовувати 0,02 % і 0,01 % розчини рибофлавіну, піроксидину і менадіону у співвідношенні 1:1:1 при режимі УФО 5-15 хвилин.

Ключові слова: фітоінактиватори, бактеріофаг, бактерії, вакцини.